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南京信帆生物:免疫組化之二步法介紹
更新時間:2016-04-26   點擊次數:1855次

二步法:EnVision System

EnVision顯色系統是將二抗和酶通過一個多聚葡聚糖骨架聯接成一個多聚體(即 EnVision)直接放大信號40-50倍,把傳統的二抗、三抗分別孵育合為一次孵育。特點:敏感、省時、方便、背景低(避免了內源性生物素干擾)。

EnVision工作程序:

1) 脫蠟、水化組織切片。
2) 預處理組織切片(據一抗具體說明而定)
3) 蒸餾水漂洗,置于TBS中。
4) 阻斷內源性過氧化物酶(僅用于EnVisionTM/HRP)
5) 蒸餾水漂洗,置于TBS,10分鐘
6) 一抗孵育10-30分鐘
7) TBS漂洗10分鐘
8) EnVisionTM孵育10-30分鐘
9) TBS漂洗10分鐘
10) 色源底物溶液孵育10分鐘
11) 蒸餾水漂洗
12) 復染及封片

免疫染色方法
The basic principles of ICC
• 抗原抗體反應
• 標記化學反應
• 呈色化學反應
要求
待檢標本形態結構
和抗原性保存良好,
抗原不從原位擴散
或丟失

Specimen preparation
取材新鮮,固定及時,形態保存完好,抗原物質的抗原性不丟失、不擴散和被破壞
• Fixation
• Sample Type
Cryostat (frozen) sections
Paraffin Sections
Antigen Retrieval Techniques
• Intention: To facilitate the immunological reaction of antibodies with antigens (increase reactivity of the majority of antigens) .
Antibody Staining
• Primary antibody may be directly labeled
• labeled secondary antibody or more complex detection system.
• secondary antibody against the immunoglobulins of the primary antibody source
減少或消除非特異性染色的方法
• zui常見原因 蛋白吸附于高電荷的膠原和結締組織成分上

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