加州大學圣地亞哥分校生物工程師的一個研究小組，采用一項新的單細胞基因組測序技術(shù)，在只有12納升體積、充滿液體的小孔中完成了基因組擴充，成功繪制來自單個大腸桿菌細胞以及大腦單個神經(jīng)元的zui完整基因組序列。
研究人員報告稱，采用新方法生成的單細胞基因組序列顯示相對較小的“擴增偏倚”——在過去的十年里這是單細胞基因組測序面對的一個zui顯著的技術(shù)障礙。所謂“擴增偏倚”就是指擴增步驟不均一，基因組不同的區(qū)域拷貝次數(shù)不同。這種不均衡使得許多下游基因組分析變得復雜化，包括從頭組裝基因組以及鑒別來自同一個體細胞間的DNA內(nèi)容物差異。
單細胞全基因組測序
測序單細胞基因組引起了許多不同領域研究人員的興趣。例如，探查單個細胞的遺傳構(gòu)成可以幫助研究人員鑒別和了解從生存在我們消化道中和皮膚上的細菌，到存活于海洋水域中的微小生物體等在實驗室中無法輕易培育的廣泛生物體。此外，研究人員還利用單細胞遺傳研究來探究癌細胞、干細胞和大腦，越來越多的研究顯示構(gòu)成大腦的細胞具有顯著的基因組多樣性。
“現(xiàn)在我們擁有了*的機會以更高的分辨率檢測單細胞中的基因組，將我們對于大腦內(nèi)基因組嵌合現(xiàn)象的理解擴展至了DNA序列水平，在這里我們揭示出了神經(jīng)元基因組的一些新體細胞變化，有可能提供關于正常大腦以及存在于例如阿爾茨海默氏癥、帕金森病或精神分裂癥等疾病中異常大腦的一些新見解，”論文的共同作者、斯克里普斯研究所Dorris神經(jīng)科學中心研究人員說。
新測序技術(shù)鑒別出了小至100萬個堿基對的單拷貝DNA獲得或喪失，這是迄今為止單細胞測序方法所能達到的zui高分辨率。近期采用一些舊技術(shù)的單細胞測序研究只能破譯至少300萬-600萬堿基對的DNA拷貝變化。
在納米級孔中擴增
擴增在12納升(nL)體積的微孔中發(fā)生，是在發(fā)表的單細胞基因組測序試驗方案中采用的zui小體積的孔。
相比于此前公布的zui單個大腸桿菌基因組數(shù)據(jù)集，新方法獲得了超過50%的大腸桿菌基因組，但將測序數(shù)據(jù)減小了3-13倍。
“這些結(jié)果證實，這一微孔取代擴增系統(tǒng)(MIDAS)提供了一種更有效的方法，無需培養(yǎng)即可組裝來自單個細胞的細菌全基因組，”作者們寫到。
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