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標題：人乳頭瘤病毒16型納米抗體的篩選及鑒定

使用單位：山西省中醫藥研究院中心實驗室2.山西農業大學羊駝生物工程實驗室3.君研生物科技(山西)有限公司4.東南大學附屬中大醫院醫學院

摘要：目的：構建人乳頭瘤病毒16型（HPV16） L1蛋白納米抗體初級文庫，通過篩選鑒定獲得一株HPV16 L1特異性納米抗體。方法：以HPV 16 L1蛋白為抗原對羊駝進行免疫，采用噬菌體展示技術構建初級抗體文庫。經3輪淘選，采用ELISA法鑒定陽性克隆，將陽性反應最強克隆的VHH序列進行真核表達。經親和純化、凝膠過濾層析純化、SDS-PAGE和WB法鑒定，獲得目的納米抗體；采用表面等離子共振（SPR）技術檢測納米抗體與HPV 16 L1蛋白之間的親和力，CCK-8法檢測納米抗體對人永生化角質細胞HaCat的毒性，熒光素酶報告基因實驗檢測納米抗體對HPV 16假病毒的中和活性。結果：初級文庫庫容為1.304×1010，豐度為6.5×10～9個/mL,ELISA法鑒定獲得36個陽性克隆。表達、純化獲得蛋白單體與二聚體，經鑒定為目的納米抗體（命名為Nb）。Nb與HPV 16 L1蛋白結合的親和力為35.41 nmol/L。Nb實驗組HaCat細胞增殖活力與空白組沒有顯著差異（P> 0.05）。與陰性組比較，0.1和1μmol/L Nb均能抑制假病毒感染293FT細胞（均P <0.01）。結論：成功獲得一株純度較好、親和力較高，對上皮細胞沒有明顯毒性作用、有效抑制HPV 16假病毒感染293FT細胞的納米抗體Nb，為防治HPV 16感染提供了有效的候選抗體類藥物。

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